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踏上威尼斯的土地，汁助战市琼斯和事先约好的史奈达博士（AlisonDoody饰）会面，他们在图书馆里凭线索找到圣盾后，却开始遭到莫名的来自十字剑兄弟的追杀。印第安纳琼斯博士（HarrisonFord饰）也是他们中的一员，优势甚至连他的父亲老琼斯（SeanConnery饰）也陷入其中——但他给琼斯留下圣杯的笔记后便不知所踪但是无往不胜的琼斯总是有办法死里逃生，傍身并狠狠地还以颜色。

二战期间，代理希特勒在世界各地召集考古学家寻找失落的约柜——圣经中引导希伯来人与上帝交流的圣物，希特勒欲借其来护佑纳粹的战争。就在大功告成之际，阿莎纳粹军却侵吞了胜利果实，还将琼斯等人留在了蛇穴里。

凭借着过人的智慧和异于常人的胆量及大无畏的勇气，姆复琼斯终于在罗马找到了指示约柜位置的太阳手杖，继而发现了约柜。

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